Метод ПЦР: анализ на гепатит С. Количественная и качественная ПЦР-диагностика: когда она нужна, что покажут анализы, как подготовиться? Расшифровка результатов количественного анализа ПЦР играет важную роль в обнаружении и проверке эффективности лечения большого числа хронических заболеваний, скажем гепатита C. Специфичность большинства тестов ОТ-ПЦР составляет 100%, поскольку конструкция праймера специфична для геномной последовательности SARS-CoV-2.
ПЦР-тестирование: как работает метод ПЦР в диагностике
Роспотребнадзор напоминает о ключевых особенностях тестирования методом ПЦР и отвечает на самые часто задаваемые вопросы. Если результат ПЦР отрицательный или нет признаков болезни, повторить тест на антитела через 2-3 недели. Тесты на ВПЧ могут быть качественными (простой ПЦР) и количественными (Digene test, ПЦР), они предназначены для выявления некоторых типов папилломавирусов. Чтобы это сделать, мы разрабатываем ПЦР-тест, который будет «смотреть» конкретно этот вариант из всего генома, есть он у человека или нет.
ПЦР - что это такое?
- Принцип метода
- ПЦР-15: описание, интерпретация результата, референсные значение
- О рекомендациях, как подготовиться к сдаче ПЦР-теста на COVID-19 - Все новости - МЧС России
- Азбука жизни. Зачем в онкологии нужны ПЦР-тесты и какую информацию о болезни хранит в себе ДНК
Маркеры гепатита С и расшифровка результатов количественного анализа HCV RNA
это определение вируса в мазке из ротоглотки методом ПЦР. Расшифровка результатов ПЦР исследований проводится в тот же день, когда получены результаты или в момент обращения к врачу. ПЦР (полимеразная цепная реакция) — это метод тестирования, который способен находить генетический материал вируса непосредственно в крови пациента, слюне или любой другой жидкости, изобретенный в 1983 году американским биохимиком Кэрри Муллисом. Если результат ПЦР отрицательный или нет признаков болезни, повторить тест на антитела через 2-3 недели. За звучной аббревиатурой ПЦР скрывается сложная и не слишком понятная для рядового пациента расшифровка — полимеразная цепная реакция.
Расшифровать анализ ПЦР онлайн
История метода Рисунок 1. История развития метода ПЦР. Появился первый прототип ПЦР-циклера — Mr. Компания Cetus получила патент на метод ПЦР. Первое упоминание о ПЦР с обратной транскрипцией в журнале Science.
Чтобы увидеть рисунок в полном размере, нажмите на него. Статьи с описанием работы он отправил в Journal of Biological Chemistry, где их отвергли... Однако в 1958 году в журнале сменился главный редактор, и статьи наконец увидели свет [3]. А уже в 1959 году Артура Корнберга удостоили Нобелевской премии по физиологии и медицине.
Норвежский биохимик Хьелль Клеппе рис. С 1968 по 1970 годы Клеппе работал постдоком в Университете Висконсина, в лаборатории Хара Гобинда Кораны — нобелевского лауреата 1968 года за расшифровку генетического кода. Именно в лаборатории знаменитого индийца чуть раньше разработали методики синтеза олигонуклеотидных праймеров — «затравок», необходимых для работы ДНК-полимеразы. Рисунок 2.
Хьелль Клеппе. Для завершения процесса репаративной репликации нужно будет добавить ДНК-полимеразу. В результате получатся уже две молекулы исходного дуплекса. Цикл можно повторять, каждый раз добавляя свежую порцию фермента».
К сожалению, эта гипотеза так гипотезой и осталась. Может, Клеппе даже и проводил какие-то эксперименты, но результаты не публиковал. Фредерик Сенгер , английский биохимик и лауреат Нобелевской премии 1958 года за работы по структуре белков [6] , предложил метод секвенирования ДНК, сейчас известный как метод Сенгера [7] , [8]. Этим он заработал еще одну нобелевскую медаль, в 1980-м, и стал единственным ученым в истории, получившим две «химических» премии [9].
Долгой трехчасовой дорогой он обдумывал отнюдь не проведение выходных, а предстоящий эксперимент по секвенированию ДНК. И тут по словам Мюллиса его озарило: он ясно представил процесс амплификации преумножения генов, который позже получит название полимеразной цепной реакции. До работы в Cetus Кэри Мюллис изучал химию в Технологическом институте Джорджии, затем биохимию в Калифорнийском университете в Беркли, а после работал постдоком в Калифорнийском университете Сан-Франциско по направлению «фармацевтическая химия». В 1979 году его пригласили в Cetus синтезировать праймеры для секвенирования, а уже через два года Мюллис возглавил лабораторию синтеза ДНК и автоматизировал производство олигонуклеотидов [10].
Рисунок 3. Кэри Мюллис. Чтобы проанализировать мутации, биологи проводили секвенирование по Сэнгеру, где используется один праймер для синтеза по одной из цепей ДНК. На серпантине по пути в Мендосино Мюллис предположил, что данные будут точнее, если использовать два праймера — для синтеза одновременно по двум цепям.
Тогда можно будет сравнить получившиеся фрагменты и исключить неточности. И вот тут-то неожиданное прозрение заставило его вздрогнуть: если повторить цикл несколько раз, то можно получить множество копий нужного фрагмента строго определенной длины — она будет ограничена праймерами, от концов которых навстречу друг другу и будут строиться новые цепи ДНК [11]! Вернувшись в понедельник в Cetus, Кэри Мюллис сразу направился в библиотеку, где попросил одного из сотрудников найти всю литературу о ДНК-полимеразе. В результате он не обнаружил ничего, касающегося амплификации.
Это утверждение — самое слабое место во всей истории, так как в собранной библиотекарем стопке статей просто не могло не быть работы Хьелля Клеппе.
Кровь доставляется в лабораторию в чистой пробирке, после чего обрабатывается иммуноферментным методом. После образования пар «антиген — антитело» обнаруживаются те или иные иммуноглобулины. Такой анализ является первым этапом диагностики гепатита С. Ее проводят при нарушении функций печени, появлении определенных симптомов, изменении состава крови, планировании и ведении беременности, подготовке к хирургическим вмешательствам. Антитела к вирусному гепатиту С чаще всего обнаруживаются случайно.
Человека этот диагноз всегда шокирует. Однако не стоит впадать в панику, в некоторых случаях анализ оказывается ложноположительным. При выявлении антител к гепатиту необходимо и начать дальнейшее обследование. Возможные показания для проведения HCV анализа Для прохождения исследования на предмет наличия гепатита С, не нужны разрешения или направления от лечащего врача, на сегодняшний день существует масса лабораторий и медицинских центров, где любой желающий может пройти HCV анализ крови. Тем не менее, существует перечень состояний, которые являются показанием к проведению данного исследования, к ним относят: Желание стать донором. Наличие в анамнезе жизни заменного переливания крови или ее компонентов.
Исключение гепатита С при наличии его вторичных признаков. Выяснение эффективности лечения гепатита С. Сдавать HCV анализ крови необходимо не ранее чем через 5-6 недель после первичного предполагаемого заражения, в противном случае даже при наличии инфекции в организме, иммуноглобулины могут выработаться не в достаточном количестве и дать ложноотрицательный результат. Необходимо сдавать после двенадцатичасового перерыва в еде — прием пищи влияет на реологические характеристики плазмы. Забор проводить утром — это связано с тем, что большинство нормативных показателей рассчитывались в утренние часы, так что для снижения вероятности ложноположительного результата, необходимо следовать этому правилу. Необходимо исключить за сутки прием гормональных, антивирусных и цитостатических препаратов.
Так же следует воздержаться от приема алкоголя вечером перед посещением лаборатории. Виды антител к гепатиту С Существует два основных класса антител к гепатиту С: Антитела класса IgM вырабатываются в среднем спустя 4-6 недель после инфицирования и, как правило, свидетельствуют об остром или недавно начавшемся процессе. Антитела класса IgG образуются после первых и указывают на хроническое и затяжное течение заболевания. В рутинной клинической практике чаще всего определяют суммарные антитела к гепатиту С Anti-HCV total. Они вырабатываются на структурные компоненты вируса спустя примерно месяц после его попадания в организм и сохраняются либо пожизненно, либо до тех пор, пока инфекционный агент не будет удален. В некоторых лабораториях определяют антитела не к вирусу вообще, а к отдельным его белкам: Anti-HCV core IgG — антитела, образующиеся в ответ на структурные протеины вируса.
Они появляются спустя 11-12 недель после заражения. Anti-NS3 отражают острый характер процесса. Anti-NS4 указывают на длительность заболевания и, возможно, имеют определенную связь со степенью поражения печени. В практической деятельности наличие антител к белкам NS3, NS4 и NS5 определяют редко, поскольку это значительно повышает общую стоимость диагностики. Более того, в подавляющем большинстве случаев выявление суммарных антител к гепатиту С и уровня вирусной нагрузки бывает достаточно для постановки положительного результата, определения стадии заболевания и планирования лечения. Кроме того, зарегистрировано более 80 субтипов генома.
К каждому из них образуются антитела. Показания для сдачи анализа Антитела в крови могут обнаруживаться через несколько месяцев после инфицирования. Поэтому человек должен пройти не менее трех тестов в следующих случаях: После незащищенного полового контакта с незнакомым партнером. Доказательств того, что гепатит С может передаваться половым путем, не найдено, однако заболевание часто обнаруживается у пациентов, ведущих беспорядочную интимную жизнь. Гепатит С диагностируют у инъекционных наркоманов. Появление антител в крови возможно после стоматологической операции, нанесения татуировок или после посещения косметолога, однако подобные случаи редки.
Перед сдачей крови доноры проходят тест на анти-HCV в обязательном порядке. Анализы делаются и перед хирургическими вмешательствами. Дополнительные диагностические процедуры показаны и при повышении уровня печеночных ферментов. После контакта с инфицированным проводится несколько анализов через определенные промежутки времени. Массовое тестирование населения в очагах инфекции препятствует эпидемии. Пациент может и сам обратиться к врачу при обнаружении у себя симптомов гепатита.
К ним относятся: пожелтение кожных покровов; общая слабость; тошнота и рвота. Только с помощью анализа на антитела к HCV можно подтвердить наличие вируса. Нередко требуется выявление суммарных антигенов. Что делать если анализ Анти-HCV положительный? Иногда положительный anti-HCV, подтверждающий инфицирование, выявляется случайно при плановом обследовании, подготовке к родам или операции. Случаются ложноположительные результаты, когда человек здоров.
Это становится ясно после повторного теста. Поскольку этого анализа недостаточно для постановки окончательного диагноза, обратившийся проходит дополнительное обследование.
Поиск по сайту Что делать, если у меня похожий, но другой вопрос?
Если вы не нашли нужной информации среди ответов на этот вопрос, или же ваша проблема немного отличается от представленной, попробуйте задать дополнительный вопрос врачу на этой же странице, если он будет по теме основного вопроса. Вы также можете задать новый вопрос, и через некоторое время наши врачи на него ответят.
Методом ПЦР также возможно выделение пленкообразующего гена золотистого стафилококка , хотя обнаружить эту условно-патогенную бактерию можно в ходе микробиологического исследования мазка. Одновременно определяют чувствительность микроорганизма к антибиотикам. Можно провериться на большее или меньшее количество ЗППП, даже на одно. ПЦР анализ на хламидии является наиболее информативным среди всех остальных. Биологический материал для мужчин и женщин — кровь или мазок. Для выявления микоплазмы целесообразнее брать мочу или соскоб. Но нужно учитывать, что точность уретрального или влагалищного мазка превосходит исследование мочи.
Востребованным является ПЦР 6, в который входит хламидиоз , уреаплазмоз , микоплазмоз ДНК mycoplasma genitalium и mycoplasma hominis , гарднереллез , трихомониаз. Показания Анализ ПЦР на ЗППП назначают для дифференциальной диагностики при появлении следующих симптомов: боль внизу живота, в том числе во время полового акта; специфические выделения из влагалища: желтые, серые, зеленые, гнойные, пенистые, водянистые, с неприятным запахом и т. ИППП могут протекать бессимптомно, особенно у мужчин. Но даже при бессимптомном течении их нужно лечить, поскольку они провоцируют возникновение тяжелых осложнений.
Антитела к вирусу гепатита С
Полимеразная цепная реакция одно из наиболее точных исследований, позволяющих выявить вирусный гепатит С. Сдавать его стоит следующим группам лиц: людям, у которых наблюдаются характерные для ВГС симптомы; беременным женщинам на любом триместре; больным, регулярно проходящим процедуру диализа; пациентам, недавно пережившим операционное вмешательство; инъекционным наркоманам; посетителям татуажных или маникюрных салонов; медицинским работникам и лаборантам, регулярно контактирующим с инфицированными выделениями; членам семей, в которых проживает зараженный пациент. Следует часто сдавать анализы тем, кто уже проходит терапевтический курс и борется с вирусным гепатитом. Это необходимо для отслеживания эффективности лечения. Как проводится тестирование и как к нему подготовиться?
Каждое тестирование требует определенной подготовки, иначе точность результатов будет снижена. Для анализа берут кровь из вены, сдавать следует в утренние часы натощак. В рамках личной безопасности, обследуемый должен следить, чтобы шприц был стерилен. Кровь из вены пациента берется в незначительном количестве, поэтому на состоянии процедура никак не сказывается.
После сдачи ПЦР пациент может отправляться домой.
Хронический вирусный гепатит С протекает с повышением печеночных ферментов и скудным проявлением симптомов. Генетический материал вируса можно обнаружить методом ПЦР через 10-12 дней после инфицирования — в этот период специфические антитела, которые образуются через несколько месяцев после заражения, отсутствуют и биохимические показатели функции печени находятся в пределах референсных значений. РНК вируса гепатита С с высокой специфичностью и чувствительностью определяют качественно или количественно. Благодаря качественному методу подтверждается факт инфицирования или гибели вируса. Это особенно важно в ранней диагностике вирусного гепатита у людей, подвергшихся риску заражения, а также при контроле за противовирусной терапией.
При лечении альфа-интерфероном отсутствие РНК вируса через 24 недели после завершения терапии служит критерием ее эффективности. Для чего используется исследование? Для раннего выявления вирусного гепатита С. Для дифференциальной диагностики гепатитов.
Ограничения метода Тем не менее не стоит думать, что ПЦР-диагностика не имеет недостатков.
У нее есть свои ограничения, но их количество настолько незначительно, что не может отрицательно повлиять на популярность и эффективность метода: Вероятность амплификации ДНК не только живого, но и погибшего микроорганизма. При проведении ПЦР-диагностики для контроля эффективности лечения необходимо соблюдать определенные требования. В частности, проводить ПЦР нужно после определенного промежутка времени 1—2 месяца , за который происходит полное исчезновение возбудителя инфекции в организме. Возможность возникновения перекрестной реакции. Подбор фрагментов ДНК праймеров осуществляется на основе знаний о генетическом строении конкретного микроорганизма.
Но теоретически такой же фрагмент может присутствовать и у других микроорганизмов, геном которых на сегодняшний день еще не расшифрован. Их присутствие в пробе может привести к ложноположительному результату анализа. Изменчивость микроорганизмов. Эта способность возбудителей к мутации иногда приводит к тому, что некоторые их штаммы становятся неуловимыми в процессе ПЦР-анализа. Чтобы уменьшить риски, разработаны стандарты объемов испытаний тест-систем ПЦР-диагностики, включающие проверку на перекрестные реакции и тестирование всех известных штаммов конкретного возбудителя.
Забор биоматериала. Процедура, предшествующая непосредственному анализу, которая осуществляется в процедурном кабинете соответствующего профиля. Забор делается с помощью стерильного оборудования только в стерильные пробирки. Материалом для исследования могут быть: Эпителиальные соскобы со слизистых оболочек: из уретры, из цервикального канала, со слизистой дыхательных путей и зева, из конъюнктивы. Забор проводится с помощью специального ершика, при этом недопустимо попадание в материал следов крови.
Собираются первые 50 г утренней мочи в стерильную емкость. Материал используется для диагностики мочеполовых инфекций. Используется для ПЦР-диагностики туберкулеза и респираторных форм микоплазмоза и хламидиоза. Мокроту собирают в стерильный флакон в количестве 15—20 мг. Кровь, сыворотка, плазма.
С их помощью диагностируются гепатиты, герпес, ВИЧ-инфекция. Для анализа используется венозная кровь 1—1,5 мл , собранная у пациента натощак в стерильную пробирку. Замораживать кровь категорически запрещается. Биологические жидкости. К ним относятся слюна, сок простаты, околоплодная, плевральная, спинномозговая, суставная жидкости.
Собираются при помощи пункции с использованием стерильного инструментария в количестве 0,1—1,5 мл в стерильные пробирки.
Поэтому все положительные пробы важно перепроверять методом ПЦР. С экспресс-наборами например, Standard Q Covid-19 человек работает сам. Это не аналог иммунохроматографии: кровь здесь не понадобится, достаточно мазка из носоглотки. Что именно нужно делать — написано в инструкции. При контакте биоматериала с реагентом происходит реакция с окрашиванием как с тестом на беременность. Такое исследование на коронавирус достаточно быстрое до 20 минут , однако не слишком точно.
Тест на антитела Антитела к коронавирусу, выявленные в организме, показывают его реакцию на возбудитель. Если он вырабатывает специфические иммуноглобулины, это может означать, что: человек переболел COVID-19 в том числе бессимптомно ; антитела способны бороться с вирусом в случае его повторного проникновения в кровь; человек может быть донором и спасать других зараженных, кто переносит заболевание тяжелее. Если тестирование показало, что антитела к коронавирусу присутствуют, это еще не значит, что их носитель больше никогда не заболеет. Хотя статистика имеется небольшая, вирусологи пришли к выводу, что положительный тест на антитела может ненадолго приравниваться к вакцинации. Однако это справедливо в течение полугода после выявления инфекции. По истечении этого срока вновь появляются риски, и пациенту рекомендована прививка. Как расшифровать анализ на антитела?
Обследуемый на антитела может иметь в организме несколько видов белков, вырабатываемых иммунной системой: IgM — реакция на любую острую инфекцию. Обычно присутствуют в организме в течение месяца после заражения, однако при COVID-19 этот срок увеличивается до 3 месяцев. Могут сохраняться даже в отсутствие вируса. Их количество должно снижаться по мере выздоровления. IgG — запоминающая реакция организма на перенесенную инфекцию. Синтезируются через 6 недель после заражения и формируют иммунитет. Если в анализе на антитела есть IgA, значит, человек столкнулся с коронавирусом.
Если их сопровождают IgG, то больной выздоравливает, если нет — инфекционное заболевание протекает в данный момент. Об устойчивости иммунной системы к вирусу говорит показатель IgG более 1,1. Возможен ли экспресс-анализ? Пройти диагностику на антитела можно и в домашних условиях.
Преимущества обращения в нашу клинику
- Преимущества ПЦР-диагностики в современной медицине:
- Что такое анализ крови на ПЦР, и зачем он нужен
- ПЦР тест на коронавирус: что это и как проводится диагностика
- Форма поиска
- Сколько стоит сдать ПЦР-анализ
Разновидности ПЦР
- ПЦР-тест и тест на антитела к коронавирусу: как разобраться в результатах?
- Что такое ПЦР анализ
- Количественный анализ на гепатит С: расшифровка, маркеры
- Цели обследования
ПЦР-диагностика на гепатит С: когда нужны анализы и что они показывают?
Как расшифровать качественный тест на антитела к коронавирусу. Например, что же означает, когда ПЦР-тест – отрицательный, а антитела IgG и IgM – положительные? Что представляет собой анализ методом ПЦР? Полимеразная цепная реакция (ПЦР, PCR) — это точный метод лабораторной диагностики, который используют для выявления возбудителей инфекционных заболеваний.
Что такое ПЦР-анализ?
Метод ПЦР позволяет идентифицировать в биологическом материале искомый участок генетического материала и обнаружить единичные молекулы ДНК микроорганизмов, не выявляемые другими методами. В зависимости от причины проведения ПЦР-теста положительный результат может указывать на наличие исследуемого возбудителя. Помимо обследования до начала терапии, анализ на ПЦР РНК ВГС необходим для суждения об исходах лечения.
ПЦР-диагностика на гепатит С: когда нужны анализы и что они показывают?
Результаты ПЦР диагностики - интерпретация. | Аббревиатура ПЦР обозначает полимеразная цепная реакция. |
HCV, РНК [реал-тайм ПЦР] | ПЦР (полимеразная цепная реакция) — это метод тестирования, который способен находить генетический материал вируса непосредственно в крови пациента, слюне или любой другой жидкости, изобретенный в 1983 году американским биохимиком Кэрри Муллисом. |
Что такое анализ ПЦР? | Основы полимеразной цепной реакции (ПЦР). |